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EP 1 694 829 B1
2° Anticorps monoclonaux spécifiques d’un épitope linéaire majeur situé en position centrale (position 217-224,
séquence : ETALALL); les représentants de ce groupe sont les anticorps monoclonaux 87 et 166. L’hybridome
produisant l’anticorps 87 a été déposé à la CNCM le 1er décembre 2004, sous le numéro I-3328.
3° Anticorps monoclonaux spécifiques d’un épitope linéaire majeur situé en position C-terminale (position 403-408,
séquence : DFFRQL), les représentants de ce groupe sont les anticorps 28, 57 et 143. L’hybridome produisant
l’anticorps 57 a été déposé à la CNCM le 1er décembre 2004, sous le numéro I-3330.
4° Anticorps monoclonaux spécifiques d’un épitope discontinu, conformationel. Ce groupe d’anticorps ne reconnaît
aucun des peptides recouvrant la séquence de la protéine N, mais réagissent fortement sur la protéine naturelle
non dénaturée. Le représentant de ce dernier groupe est l’anticorps 86. L’hybridome produisant cet anticorps a été
déposé à la CNCM le 1er décembre 2004, sous le numéro I-3329.
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[0299]
Le Tableau VIII ci-après résume les résultats de cartographie épitopique obtenus :
Tableau VIII : Mapping épitopique des anticorps monoclonaux
15
20
25
30
35
40
45
50
Anticorps
Epitope
Position
Région
28
DFSRQL Q
403 ... 408
C-Ter.
143
DFSRQL Q
76
DFSRQL Q
57
DFSRQL Q
FFGMS RI
315 .... 319
146
LPQRQ
383...387
166
ETALALLLL
217 ...224
87
ETALALL
217... 224
156
INTNSGP
75... 81
86
Conformationnel
212
Conformationel
170
Conformationnel
centrale
N - Ter.
[0300] En outre, comme illustré notamment aux figures 18 et 19, ces anticorps ne présentent pas de réactivité en
ELISA et/ou en WB, vis à vis de la protéine N du coronavirus humain 229 E.
Exemple 10 : Combinaisons des anticorps monoclonaux pour le développement d’un test d’immunocapture
sensible et spécifique de l’antigène viral N dans le sérum ou les fluides biologiques des patients contaminés
par le virus SARS Co V
[0301] Les anticorps listés ci-dessous ont été retenus en raison de leurs propriétés bien particulières pour une étude
supplémentaire de capture et détection de la protéine virale N, dans le sérum des sujets ou patients.
[0302] Ces anticorps ont été produits en ascite sur souris, purifiés par chromatographie d’affinité et utilisés seuls ou
en combinaison comme anticorps de capture, et comme anticorps signal.
[0303] Liste des anticorps sélectionnés pour le propos :
-
Acm anti région C-ter (n° 28, 57, 143)
Acm anti région centrale (n° 87, 166)
Acm anti région N-ter (n° 156)
Acm anti épitope discontinu, conformationnel (86)
1) Préparation des réactifs :
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a) Plaques ELISA immunocapture
[0304]
Les plaques sont sensibilisées avec les solutions d’anticorps à 5 Pg/ml en tampon carbonate 0,1 M, pH.9,6.
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