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d’hybridation avec les séquences d’ARN génomiques ou antigénomiques de l’isolat tel que défini ci-dessus.
[0052] Les molécules d’acide nucléique telles que définies ci-dessus sont obtenues par les méthodes classiques,
connues en elles-mêmes, en suivant les protocoles standards tels que ceux décrits dans Current Protocols in Molecular
Biology (Frederick M. AUSUBEL,2000, Wiley and son Inc, Library of Congress, USA). Par exemple, elles peuvent être
obtenues par amplification d’une séquence nucléique par PCR ou RT-PCR ou bien par synthèse chimique totale ou
partielle.
[0053] Les Inventeurs décrivent également une puce ou filtre à ADN ou à ARN, caractérisé en ce qu’il comprend au
moins un polynucléotide ou l’un de ses fragments tels que définis ci-dessus.
[0054] Les puces ou filtres à ADN ou à ARN tels que définis ci-dessus sont préparés par les méthodes classiques,
connues en elles-mêmes, comme par exemple greffage chimique ou électrochimique d’oligonucléotides sur support de
verre ou de nylon.
[0055] Les Inventeurs décrivent également un vecteur de clonage et/ou d’expression recombinant, notamment un
plasmide, un virus, un vecteur viral ou un phage comprenant un fragment d’acide nucléique tel que défini ci-dessus. De
préférence, ledit vecteur recombinant est un vecteur d’expression dans lequel ledit fragment d’acide nucléique est placé
sous le contrôle d’éléments régulateurs de la transcription et de la traduction appropriés. En outre, ledit vecteur peut
comprendre des séquences (étiquettes ou tag) fusionnées en phase avec l’extrémité 5’ et/ou 3’ dudit insert, utiles pour
l’immobilisation, et/ou la détection et/ou la purification de la protéine exprimée à partir dudit vecteur.
[0056] Ces vecteurs sont construits et introduits dans des cellules hôtes par les méthodes classiques d’ADN recombinant et de génie génétique, qui sont connues en elles-mêmes. De nombreux vecteurs dans lesquels on peut insérer
une molécule d’acide nucléique d’intérêt afin de l’introduire et de la maintenir dans une cellule hôte, sont connus en
eux-mêmes ; le choix d’un vecteur approprié dépend de l’utilisation envisagée pour ce vecteur (par exemple réplication
de la séquence d’intérêt, expression de cette séquence, maintien de la séquence sous forme extrachromosomique ou
bien intégration dans le matériel chromosomique de l’hôte), ainsi que de la nature de la cellule hôte.
[0057] Ledit plasmide est notamment sélectionné parmi les plasmides suivants :
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30
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35
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40
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45
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55
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le plasmide, dénommé SARS-S, compris dans la souche bactérienne déposée sous le n° I-3059, le 20 juin 2003,
auprès de la Collection Nationale de Cultures de Microorganismes, 25 rue du Docteur Roux, 75724 Paris Cedex
15 ; il contient la séquence d’ADNc codant pour la protéine S de la souche de SARS-CoV issue du prélèvement
répertorié sous le n° 031589, laquelle séquence correspondant aux nucléotides des positions 21406 à 25348 (SEQ
ID NO : 4), en référence à la séquence Genbank AY274119.3,
le plasmide, dénommé SARS-S1, compris dans la souche bactérienne déposée sous le n° I-3020, le 12 mai 2003,
auprès de la Collection Nationale de Cultures de Microorganismes, 25 rue du Docteur Roux, 75724 Paris Cedex
15 ; il contient un fragment 5’ de la séquence d’ADNc codant pour la protéine S de la souche de SARS-CoV issue
du prélèvement répertorié sous le n° 031589, telle que définie ci-dessus, lequel fragment correspondant aux nucléotides des positions 21406 à 23454 (SEQ ID NO :5), en référence à la séquence Genbank AY274119.3 Tor2,
le plasmide, dénommé SARS-S2, compris dans la souche bactérienne déposée sous le n° I-3019, le 12 mai 2003,
auprès de la Collection Nationale de Cultures de Microorganismes, 25 rue du Docteur Roux, 75724 Paris Cedex
15 ; il contient un fragment 3’de la séquence d’ADNc codant pour la protéine S de la souche de SARS-CoV issue
du prélèvement répertorié sous le n° 031589, telle que définie ci-dessus, lequel fragment correspondant aux nucléotides des positions 23322 à 25348 (SEQ ID NO :6), en référence à la séquence Genbank n° d’accès AY274119.3,
le plasmide, dénommé SARS-SE, compris dans la souche bactérienne déposée sous le n° I-3126, le, 13 novembre
2003, auprès de la Collection Nationale de Cultures de Microorganismes, 25 rue du Docteur Roux, 75724 Paris
Cedex 15; il contient l’ADNc correspondant à la région située entre l’ORF-S et l’ORF-E et chevauchant l’ORF-E de
la souche de SARS-CoV issue du prélèvement répertorié sous le n° 031589, telle que définie ci-dessus, laquelle
région correspondant aux nucléotides des positions 25110 à 26244 (SEQ ID NO :8), en référence à la séquence
Genbank n° d’accès AY274119.3,
le plasmide, dénommé SARS-E, compris dans la souche bactérienne déposée sous le n° I-3046, le 28 mai 2003,
auprès de la Collection Nationale de Cultures de Microorganismes, 25 rue du Docteur Roux, 75724 Paris Cedex
15 ; il contient la séquence d’ADNc codant pour la protéine E de la souche de SARS-CoV issue du prélèvement
répertorié sous le n° 031589, telle que définie ci-dessus, laquelle séquence correspondant aux nucléotides des
positions 26082 à 26413 (SEQ ID NO :15), en référence à la séquence Genbank n° d’accès AY274119.3,
le plasmide, dénommé SARS-M ; compris dans la souche bactérienne déposée sous le n° I-3047, le 28 mai 2003,
auprès de la Collection Nationale de Cultures de Microorganismes, 25 rue du Docteur Roux, 75724 Paris Cedex
15 ; il contient la séquence d’ADNc codant pour la protéine M de la souche de SARS-CoV issue du prélèvement
répertorié sous le n° 031589, telle que définie ci-dessus ; laquelle séquence correspondant aux nucléotides des
positions 26330 à 27098 (SEQ ID NO :18), en référence à la séquence Genbank n° d’accès AY274119.3,
le plasmide dénommé SARS-MN, compris dans la souche bactérienne déposée sous le n° I-3125, le 13 novembre
2003, auprès de la Collection Nationale de Cultures de Microorganismes, 25 rue du Docteur Roux, 75724 Paris
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