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EP 1 694 829 B1
forme soluble (Ssol). On s’attend à ce que le polypeptide Ssol soit sécrété des cellules infectées par le virus MVSchw2SARS-Ssol comme c’est le cas lorsque ce même polypeptide est exprimé dans des cellules de mammifères après
transfection transitoire des séquences correspondantes (cf exemple 11 ci-dessus).
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4) Applications
[0412] Ayant montré que les virus MVSchw2-SARS-S et MVSchw2-SARS-Ssol permettent l’expression de la S du
SRAS-CoV, leur capacité à induire une réponse immunitaire protectrice contre le SRAS-CoV chez la souris CD46+/IFN-αβR-/-, qui est susceptible à l’infection par le MV, est évaluée. La réponse en anticorps des souris immunisées est
évaluée par test ELISA contre les antigènes natifs du SRAS-CoV et pour leur capacité à neutraliser l’infectivité du SRASCoV in vitro, en utilisant les méthodologies décrites ci-dessus. Le pouvoir protecteur de la réponse sera évalué en
mesurant la réduction de la charge virale pulmonaire 2 jours après une infection d’épreuve non létale par le SRAS-CoV.
[0413] Des virus rougeole recombinants de seconde génération sont construits en substituant les séquences sauvages
des gènes S et Sol par des gènes synthétiques optimisés pour l’expression en cellules de mammifères, décrits à l’exemple
15 ci-dessus. Ces virus rougeole recombinants sont susceptibles d’exprimer des quantités plus importantes des antigènes S et Ssol et donc de présenter une immunogénicité accrue.
[0414] Alternativement, les gènes sauvages ou synthétiques codant pour la protéine S ou le polypeptide Ssol peuvent
être insérés dans le vecteur rougeole MVSchw-ATU3 sous la forme d’une unité de transcription supplémentaire localisée
entre les gènes H et L, puis les virus recombinants produits et caractérisés de façon similaire. Cette insertion est
susceptible de générer des virus recombinants possédant des caractéristiques (multiplication du virus, niveau d’expression du transgène) différentes et possiblement une immunogénicité améliorée par rapport à ceux obtenus après insertion
des transgènes entre les gènes P et N.
[0415] Le virus rougeole recombinant MVSchw2-SARS-Ssol peut être utilisé pour la production en quantité et la
purification de l’antigène Ssol en vue d’applications diagnostiques et vaccinales.

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Exemple 18 : Autres applications liées à la protéine S
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a) Les vecteurs lentiviraux permettant l’expression de la S ou de Ssol (voire de fragments de la S) peuvent constituer
un vaccin recombinant contre le SRAS-CoV, pour être utilisé en prophylaxie humaine et vétérinaire. Afin de démontrer
la faisabilité d’un tel vaccin, l’immunogénicité des vecteurs lentiviraux recombinants TRIP-SD/SA-S-WPRE et TRIPSD/SA-Ssol-WPRE est étudiée chez la souris.
b) Des anticorps monoclonaux sont produits à l’aide du polypeptide recombinant Ssol. D’après les résultats présentés
à l’exemple 14 ci-dessus, ces anticorps ou du moins la majorité d’entre eux reconnaîtront la forme native de la S
du SRAS-CoV et seront susceptibles d’applications diagnostiques et/ou prophylactiques.
c) Un test de sérologie du SRAS est mis au point avec le polypeptide Ssol utilisé comme antigène et la méthodologie
du double épitope.
SEQUENCE LISTING
[0417]

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<110> INSTITUT PASTEUR
CENTRE NATIONAL DE LA RECHERCHE SCIENTIFIQUE
UNIVERSITE PARIS 7
VAN DER WERF, Sylvie
ESCRIOU, Nicolas
CRESCENZO-CHAIGNE, Bernadette
MANUGUERRA, Jean-Claude
KUNST, Franck
CALLENDRET, Benoît
BETTON, Jean-Michel
LORIN, Valérie
GERBAUD, Sylvie
BURGUIERE, Ana Maria
AZEBI, Saliha
CHARNEAU, Pierre

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