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EP 1 694 829 B1

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coronavirus associé au SRAS par détection de la nucléoprotéine native (protéine N), en particulier caractérisé en ce
que l’anticorps utilisé pour la capture de la nucléoprotéine virale native est un anticorps monoclonal spécifique de la
région centrale et/ou d’un épitope conformationnel.
[0113] Selon un mode de réalisation dudit test, l’anticorps utilisé pour la capture de la protéine N est l’anticorps
monoclonal Acm87, produit par l’hybridome déposé à la CNCM le 1er décembre 2004 sous le numéro I-3328.
[0114] Selon un autre mode de réalisation dudit test d’immunocapture, l’anticorps utilisé pour la capture de la protéine
N est l’anticorps monoclonal Acm86, produit par l’hybridome déposé à la CNCM le 1er décembre 2004 sous le numéro
I-3329.
[0115] Selon un autre mode de réalisation dudit test d’immunocapture, les anticorps monoclonaux Acm86 et Acm87
sont utilisés pour la capture de la protéine N.
[0116] Dans les tests d’immunocapture selon l’invention, on peut utiliser pour la révélation de la protéine N, l’anticorps
monoclonal Acm57, produit par l’hybridome déposé à la CNCM le 1er décembre 2004 sous le numéro I-3330, ledit
anticorps étant conjugué à une molécule ou une particule révélatrice.
[0117] Conformément audit test d’immunocapture, une combinaison des anticorps Acm57 et Acm87, conjugués à
une molécule ou une particule révélatrice, est utilisée pour la révélation de la protéine N.
[0118] Une molécule révélatrice peut être un atome radioactif, un colorant, une molécule fluorescente, un fluorophore,
une enzyme ; une particule révélatrice peut être, par exemple : de l’or colloïdal, une particule magnétique ou une bille
de latex.
[0119] La présente invention a également pour objet un réactif de détection d’un coronavirus associé au SRAS,
caractérisé en ce qu’il est sélectionné dans le groupe constitué par une souche isolée de coronavirus telle que définie
ci-dessus et un polynucléotide tel que défini ci-dessus.
[0120] Les Inventeurs décrivent également un réactif de détection d’un coronavirus associé au SRAS, caractérisé en
ce qu’il est sélectionné dans le groupe constitué par :
(a) une paire d’amorces ou une sonde telles que définies ci-dessus,
(b) un vecteur recombinant tel que défini ci-dessus ou une cellule modifiée telle que définie ci-dessus,
(c) un anticorps ou un fragment d’anticorps tel que défini ci-dessus,
(d) une combinaison d’anticorps comprenant les anticorps monoclonaux Acm86 et/ou Acm87, et l’anticorps monoclonal Acm57, telle que définie ci-dessus,
(e) une puce ou un filtre tels que définis ci-dessus.
[0121] Les Inventeurs décrivent également une méthode de détection d’une infection par un coronavirus associé au
SRAS, à partir d’un échantillon biologique, par ELISA IgG indirect utilisant la protéine N, laquelle méthode est caractérisée
en ce que les plaques sont sensibilisées par une solution de protéine N à une concentration comprise entre 0,5 et
4Pg/mL, de préférence 2Pg/mL, dans un tampon PBS 10mM pH 7,2, rouge de phénol à 0,25mL /L.
[0122] Les Inventeurs décrivent, en outre, une méthode de détection d’une infection par un coronavirus associé au
SRAS, à partir d’un échantillon biologique, par ELISA double épitope, caractérisée en ce que le sérum à tester est
mélangé à l’antigène de révélation, ledit mélange étant ensuite mis au contact de l’antigène fixé sur un support solide.
[0123] Selon une variante des tests de détection des coronavirus associé au SRAS, ces tests combinent un ELSA
utilisant la protéine N, et un autre ELSA utilisant la protéine S, tel que décrit plus bas.
[0124] Les Inventeurs décrivent aussi un complexe immun formé d’un anticorps ou d’un fragment d’anticorps polyclonal
ou monoclonal tel que défini ci-dessus, et d’une protéine ou d’un peptide du coronavirus associé au SRAS.
[0125] La présent invention a en outre pour objet un kit de détection d’un coronavirus associé au SRAS, caractérisé
en ce qu’il comprend au moins un réactif sélectionné dans le groupe constitué par une souche isolée de coronavirus et
un polynucléotide.
[0126] Les Inventeurs décriventa en outre un kit de détection d’un coronavirus associé au SRAS, caractérisé en ce
qu’il comprend au moins un réactif sélectionné dans le groupe constitué par : une paire d’amorces, une sonde, une puce
à ADN ou à ARN, un vecteur recombinant, une cellule modifiée, une protéine ou un peptide, un anticorps, et une puce
à protéine tels que définis ci-dessus.
[0127] Les Inventeurs décrivent en outre, une composition immunogène, caractérisée en ce qu’elle comprend au
moins un produit sélectionné dans le groupe constitué par :
a) une protéine ou un peptide tels que définis ci-dessus,
b) un polynucléotide de type ADN ou ARN ou l’un de ses fragments représentatifs tels que définis ci-dessus, de
séquence choisie parmi :
(i) la séquence SEQ ID NO : 1 ou son équivalent ARN
(ii) la séquence hybridant dans des conditions de forte stringence avec la séquence SEQ ID NO : 1,

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